技術(shù)原理
DIA（Data independent acquisition）是基于靜電場軌道阱Orbitrap的一項(xiàng)全新的、全息式數(shù)據(jù)非依賴性采集定量技術(shù)。DIA將質(zhì)譜的全掃描范圍分為若干個窗口，高速、循環(huán)地對每個窗口中的所有離子進(jìn)行選擇、碎裂及檢測，從而無遺漏、無差異地獲得樣本中所有離子的全部碎片信息。DIA無需指定目標(biāo)肽段，且掃描點(diǎn)數(shù)均勻，利用譜圖庫即可實(shí)現(xiàn)定性確證和定量離子篩選，并可實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)回溯。
目前主流的數(shù)據(jù)分析是基于DDA/DIA 構(gòu)建的譜庫和實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)對樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。公共的譜圖庫可以從各大蛋白質(zhì)組研究數(shù)據(jù)平臺下載，但對于一些特異性的樣本，為了有更好的鑒定結(jié)果，還需要通過實(shí)驗(yàn)樣本建立DDA參考數(shù)據(jù)庫。
提取的蛋白酶解之后，利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，通過比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強(qiáng)度，從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量。每條肽段的豐度（量）與其在質(zhì)譜中的峰面積或信號強(qiáng)度成正比；而不同樣品的同一條肽段在LC上的保留時間（retention time， RT）是一致的，因此，可以通過對比譜圖庫中的信息，再整合到相應(yīng)蛋白，實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)在不同樣本中的相對表達(dá)水平的定量分析。

DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理圖

DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)流程圖

DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析流程圖

技術(shù)特點(diǎn)
l  重現(xiàn)性好：采集所有離子及碎片譜圖，不丟失任何信息；
l  選擇性好：基于碎片離子（即母子離子對）定量，與 SRM/MRM 相當(dāng)；
l  準(zhǔn)確度高：循環(huán)時間固定，掃描點(diǎn)數(shù)均勻，定量準(zhǔn)確度高；
l  通量高：同時監(jiān)測所有目標(biāo)蛋白/化合物，通量無上限；
l  時效性強(qiáng)：對于易降解樣品可以即刻采集，獲得數(shù)據(jù)后再進(jìn)行深入挖掘；
l  數(shù)據(jù)易追溯：即使目前的水平無法發(fā)現(xiàn)某些蛋白質(zhì)/化合物，未來還可以回溯。

 
樣品要求

l  常規(guī)動物組織（腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉、皮膚等）：送樣量>200mg；
l  常規(guī)植物組織（幼嫩的根、葉、花、愈傷組織等）：送樣量>1g；
l  懸浮/貼壁細(xì)胞：送樣量>1x10⁷個細(xì)胞或體積>50ul細(xì)胞沉淀；
l  血漿/血清樣本：送樣量>500ul；
l  微生物菌體：送樣量濕重>100mg或體積>100ul。
 
注意事項(xiàng)
l  在蛋白質(zhì)制備過程中使組織始終置于冰上，離心機(jī)、離心管等儀器設(shè)備要提前預(yù)冷，以防蛋白質(zhì)的降解；
l  要加入適量的裂解液，裂解一定要充分、均勻；
l  植物和動物組織樣本一般采用研磨或勻漿機(jī)破碎處理，細(xì)胞和菌體樣本一般采用超聲破碎，破碎過程中要避免材料的融化；
l  對預(yù)處理好的材料，若不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng)冷凍保存（－80℃），對于易分解的生物大分子應(yīng)選用新鮮材料制備；
l  對于樣本量需求少的研究，如果組織樣品本身非常細(xì)小，可直接裂解，以減少蛋白質(zhì)的損失。
 
項(xiàng)目報告
l  實(shí)驗(yàn)步驟
l  液相/質(zhì)譜參數(shù)
l  質(zhì)譜譜圖
l  蛋白質(zhì)的鑒定定量信息
l  生物信息分析

 
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