MRM/PRM定量蛋白質組學
技術原理
靶向蛋白質組PRM(平行反應監測, Parallel Reaction Monitoring),是一種基于高分辨、高精度質譜的靶向定量技術,能夠對目標蛋白質/肽段(以及含有修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段的精準定量。靶向蛋白質組掃描就像精準狙擊,排除干擾,目標明確。
四級桿(Q1)首先選出的目標肽段離子,進入碰撞室中打碎后,所有的碎片離子經過質量分析器產生一張高分辨的二級質譜圖,通過提取其中的碎片離子信息即可實現目標肽段的定量。
PRM/MRM定量蛋白質組學技術原理圖
技術特點
l 靈敏度高,提高檢測目標離子的準確度;
l 通量高,一次性可以鑒定多達200多個蛋白
l 可以進行絕對定量分析,無需依賴抗體;
l 可直接檢測二級所有離子,減少了子離子的挑選和優化過程。
樣品要求
l 常規動物組織(腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉、皮膚等):送樣量>200mg;
l 常規植物組織(幼嫩的根、葉、花、愈傷組織等):送樣量>1g;
l 懸浮/貼壁細胞:送樣量>1x10
7個細胞或體積>50ul細胞沉淀;
l 血漿/血清樣本:送樣量>500ul;
l 微生物菌體:送樣量濕重>100mg或體積>100ul。
注意事項
l 在蛋白質制備過程中使組織始終置于冰上,離心機、離心管等儀器設備要提前預冷,以防蛋白質的降解;
l 要加入適量的裂解液,裂解一定要充分、均勻;
l 植物和動物組織樣本一般采用研磨或勻漿機破碎處理,細胞和菌體樣本一般采用超聲破碎,破碎過程中要避免材料的融化;
l 對預處理好的材料,若不立即進行實驗,應冷凍保存(-80℃),對于易分解的生物大分子應選用新鮮材料制備;
l 對于樣本量需求少的研究,如果組織樣品本身非常細小,可直接裂解,以減少蛋白質的損失。
項目報告
l 實驗步驟
l 液相/質譜參數
l 質譜譜圖
l 蛋白質的鑒定定量信息
l 生物信息分析
MRM/PRM定量蛋白質組學一站式服務
l 您只需下單-寄送樣品
l 明德正康為您完成-樣品處理-上機分析-數據分析-項目報告