技術(shù)原理
蛋白質(zhì)翻譯后修飾（Protein post-Translational Modification，PTM）在生命體中具有十分重要的作用，與基因表達、信號傳導通路、細胞分裂等進程密切相關(guān)。同一蛋白在不同生理狀態(tài)、不同亞細胞定位、不同氨基酸位點的修飾，可能對應不同的功能。因此蛋白質(zhì)翻譯后修飾是當前的一個研究熱點和難點。一般常見的修飾類型主要有磷酸化、甲基化、乙酰化、生物素化、磷酸化、糖基化、泛素化、二硫鍵等多種翻譯后修飾類型。
翻譯后修飾位點鑒定的技術(shù)原理：先通過IP得到目的蛋白，再通過SDS-PAGE對目的蛋白進行分離純化，將膠條上目的蛋白對應的條帶切下進行膠內(nèi)酶解和高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS/MS)，通過數(shù)據(jù)庫檢索得到蛋白上的修飾位點。

 

翻譯后修飾位點鑒定技術(shù)原理圖

技術(shù)特點
l  針對不同的修飾類型采取不同的富集方式；
l  富集效率高，可提高修飾肽段的檢測效率；
l  基于高精度的質(zhì)譜分析，可對修飾位點進行精確鑒定；
l  可對多種修飾類型進行鑒定。
 
樣品要求
l  SDS-PAGE膠條：銀染、考染條帶可見；
l  蛋白質(zhì)溶液：蛋白質(zhì)總量>5μg，濃度>0.1μg/μl。
 
注意事項
l  在蛋白質(zhì)制備過程中使組織始終置于冰上，離心機、離心管等儀器設備要提前預冷，以防蛋白質(zhì)的降解；
l  對預處理好的材料，若不立即進行實驗，應冷凍保存（－80℃），對于易分解的生物大分子應選用新鮮材料制備。
 
項目報告
l  實驗步驟
l  質(zhì)譜參數(shù)
l  質(zhì)譜譜圖
l  蛋白質(zhì)修飾位點的鑒定信息
 
翻譯后修飾位點鑒定一站式服務
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