蛋白質純度分析
技術原理
在許多生物學研究中,蛋白質純度的高低直接決定了實驗的成敗,因此蛋白質的純化以及純度分析具有很重要的意義。十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱SDS-PAGE)是比較常用的一種蛋白純化分析技術。SDS-PAGE可根據不同蛋白質分子所帶電荷的差異及分子大小不同所產生的遷移率的不同而將蛋白質分離。如果蛋白質樣品中含有多個蛋白質或者純化蛋白樣品中含有其他雜蛋白,經過SDS-PAGE分離后不同的蛋白質會被分離成多個蛋白條帶。如果純化的樣品中只含有同一種蛋白質,蛋白質樣品電泳后,則只顯現一條蛋白條帶。由此SDS-PAGE技術可以對蛋白質樣品的純度進行分析。
蛋白質SDS-PAGE分析流程:
1)樣品處理:在蛋白樣品中加入等量含有β-巰基乙醇的2x loading buffer,煮沸10分鐘;
2)電泳準備:配置合適濃度的SDS分離膠,安裝電泳槽,注入1x的電泳液;
3)蛋白樣品上樣:根據蛋白質濃度,取適量處理過的蛋白樣品依次加入電泳孔槽內,另外取適量蛋白標準marker加入其它空余孔槽內;
4)開始電泳:接通電源,將電壓調至120v,保持電壓恒定;
5)剝離膠:當溴酚藍遷移至凝膠底部,停止電泳;將蛋白膠取出,并切去濃縮膠和分離膠底部的溴酚藍膠條;
6)染色:使用R250染色液對蛋白膠染色1小時;
7)脫色:使用脫色液對染色的蛋白膠脫色至背景干凈,蛋白條帶清晰可見;
8)拍照分析。
蛋白質純度分析技術原理圖
技術特點
l 技術非常成熟,分析結果準確可靠。
樣品要求
l 請使用足量的干冰運輸,并盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。
項目報告
l 實驗步驟;
l 相關的SDS-PAGE參數;
l 蛋白質純度分析結果
蛋白質純度分析一站式服務
l 您只需下單-寄送樣品
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